l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細(xì)胞來源

國家資源庫（上海中科院）

l 細(xì)胞背景

A3亞克隆來自Jurkat細(xì)胞系。 用Fas抗體處理Jurkat細(xì)胞，用有限稀釋法獲得一個細(xì)胞系，此細(xì)胞系對Fas介導(dǎo)的凋亡產(chǎn)生自發(fā)抗性的比例較低。 得到的亞克隆對Fas-介導(dǎo)的凋亡十分敏感。 挑選對新霉素具有抗性的野生型A3細(xì)胞，并三次用移碼突變誘變劑ICR-191進行處理以分離具有抗Fas抗體殺傷的隱性突變體。

l 細(xì)胞特性

1） 來源：T淋巴細(xì)胞；T細(xì)胞白血病

2） 形態(tài)：淋巴母細(xì)胞,懸浮生長

3） 含量：>1x106 細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件：

1）準(zhǔn)備 1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基（推薦：awcell-0002）優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%，P/S 1%

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項：

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加*培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×106個/mL（不同細(xì)胞對密度要求不同，）可以維持細(xì)胞的正常生長。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。