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小鼠胚胎成纖維細胞MEF

簡要描述:小鼠胚胎成纖維細胞MEF取孕9天的615小鼠胚胎,去除腦、心臟等培養(yǎng)建立。該細胞可用作飼養(yǎng)層細胞,支持胚胎干細胞ES的生長并維持ES未分化的狀態(tài)。當作為飼養(yǎng)層細胞時,MEF需經(jīng)絲裂mei素C處理停止生長。建議作為ES細胞的飼養(yǎng)層時,MEF不要超過6代。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-08-28
  • 訪  問  量: 311

詳細介紹

應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

小鼠胚胎成纖維細胞MEF 種屬鑒定 安為生物

小鼠胚胎成纖維細胞MEF

MEF【MEF】

l 細胞鑒定

種屬鑒定已通過

l 細胞來源

國家資源庫

l 細胞背景

取孕9天的615小鼠胚胎,去除腦、心臟等培養(yǎng)建立。該細胞可用作飼養(yǎng)層細胞,支持胚胎干細胞ES的生長并維持ES未分化的狀態(tài)。當作為飼養(yǎng)層細胞時,MEF需經(jīng)絲裂mei素C處理停止生長。建議作為ES細胞的飼養(yǎng)層時,MEF不要超過6代。

l 細胞特性

 

1) 來源:小鼠胚胎

2) 形態(tài):成纖維細胞樣,貼壁生長

3) 含量:>1x106  細胞數(shù)

4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用

l 培養(yǎng)條件

1) 準備D/F12(推薦awcell-0005)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項

 

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10?S的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

l 運輸形式

低溫:(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

常溫: (2) T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,并會慢慢充滿液氮。解凍時,液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

 
在進行ESC或iPSC的實驗時,使用MEF作為飼養(yǎng)層是至關(guān)重要的,因為它們能夠分泌一些細胞因子,如肝細胞生長因子(HGF)和轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β),這些因子有助于抑制干細胞的分化。此外,MEF細胞在培養(yǎng)過程中經(jīng)過滅活處理,確保它們不會增殖并干擾干細胞的生長。

  選擇高質(zhì)量的MEF細胞對于實驗的成功至關(guān)重要。好的MEF細胞應(yīng)具備以下特點:生長停滯,確保細胞已經(jīng)過滅活處理;具有高復(fù)蘇率,通常大于80%;以及對ESC/iPSC具有強大的支持能力,這可以通過觀察干細胞形態(tài)和檢測ALP表達水平來評估。

  OriCell®是提供高質(zhì)量MEF細胞的供應(yīng)商之一,他們的產(chǎn)品經(jīng)過預(yù)滅活處理,確保了高復(fù)蘇率和對ESC/iPSC的良好支撐能力。此外,OriCell®還提供專門針對MEF細胞優(yōu)化的培養(yǎng)基,以保證細胞的高復(fù)蘇和貼壁效率。

  值得注意的是,盡管MEF細胞在干細胞研究中非常有用,但它們也可能帶來一些挑戰(zhàn),例如細胞老化和污染的風險。因此,研究人員需要仔細選擇和處理這些細胞,以確保實驗的準確性和可靠性。

 

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